1. Laver les sections en PBS avec 0.5% Triton-X 100 à température ambiante pendant 10 min X 3
2. Incuber les sections en PBS avec 0.3% Triton-X 100 à température ambiante pendant 30 min
3. Incuber les sections avec 10% de sérum avec 0.3% Triton-X 100 à 4°C sur la nuit (sérum dilué en PBS, le choix du sérum est déterminé par l’espèce hôte de l’anticorps secondaire)
4. Incuber le 1er anticorps : diluer le 1er anticorps dans 5% de sérum avec 0.3% Triton-X 100, incuber les sections avec le 1er anticorps à 4°C overnight
5. Laver les sections en PBS avec 0.3% Triton-X 100 à température ambiante pendant 10 min X 4
6. Incuber l’anticorps secondaire : diluer l’anticorps secondaire dans 5% de sérum avec 0.3% Triton-X 100, incuber les sections avec l’anticorps secondaire à température ambiante pendant 60 min (DAPI ou autre colorant peut être ajouté à ce moment)
7. Laver les sections en PBS avec 0.3% Triton-X 100 à température ambiante pendant 10 min X 4 et monter les lames
Pour la coloration de la ß-Gal :
Après l’incubation du 1er anticorps, utiliser un anticorps biotinylé anti-lapin (1:200), incuber à température ambiante pendant 1 h pour amplifier le signal puis laver les sections en PBS avec 0.3% Triton-X 100 à température ambiante pendant 10 min X 4, puis utiliser Avidin conjugué A488 (1:500 to 1:1000) pour la détection du signal.